База знаний

Часто задаваемые вопросы и устранение неполадок

Сомнительные результаты

Сомнительные результаты могут быть связаны с иммунным статусом пациента, но также могут быть связаны с рядом технических факторов:

  • Более 16 часов с момента взятия крови до инкубации при 37 ° C.
  • Хранение крови вне рекомендуемого температурного диапазона (22 ° С ± 5 ° С).
  • Недостаточное смешивание пробирок для забора крови.
  • Неполная промывка планшета ELISA.

Если при сборе проб крови или обращении с ними возникают технические проблемы, повторите весь тест QF-CMV с новыми образцами. Повторение ELISA-теста стимулированной плазмы может быть выполнено, если подозревается какое-либо процедурное отклонение. Не следует ожидать, что сомнительные результаты (из-за низких значений Mitogen) изменятся при повторе, если только в тесте ELISA не было ошибки.

Образцы свернутой плазмы

Если при длительном хранении образцов плазмы образуются фибриновые сгустки, отцентрируйте образцы для осаждения свернутого материала и облегчения пипетирования плазмы.

Устранение неполадок ELISA

Неспецифическое развитие цвета

Возможная причина Решение
Неполная промывка
планшета
Вымойте планшет по крайней мере 6 раз с 400 мкл / лунку промывочного буфера. В зависимости от используемой стиральной машины может потребоваться более 6 циклов мойки. Следует использовать время выдержки не менее 5 секунд между циклами.
Перекрестное загрязнение лунок ELISA Будьте осторожны при дозировании и смешивании образца, чтобы минимизировать риск.
Срок годности комплекта / компонентов истек Убедитесь, что комплект используется до истечения срока годности.Убедитесь, что восстановленный стандарт и конъюгат 100x концентрат используются в течение трех месяцев с даты вскрытия.
Раствор ферментного субстрата загрязнен Откажитесь от субстрата, если существует синяя окраска. Убедитесь, что используются чистые резервуары с реагентами.
Перемешивание плазмы в центрифуге Убедитесь, что образцы плазмы осторожно собирают сверху гелем, не пипетируя вверх и вниз, стараясь не повредить материал на поверхности геля.

Высокий фон

Возможная причина Решение
Неполная промывка планшета Вымойте планшет по крайней мере 6 раз с 400 мкл / лунку промывочного буфера. В зависимости от используемой стиральной машины может потребоваться более 6 циклов мойки. Следует использовать время выдержки не менее 5 секунд между циклами.
Слишком высокая температура инкубации Инкубацию ИФА следует проводить при комнатной температуре (22 ° С ± 5 ° С).
Срок годности комплекта / компонентов истек Убедитесь, что комплект используется до истечения срока годности.Убедитесь, что восстановленный стандарт и конъюгат 100x концентрат используются в течение 3 месяцев с даты вскрытия.
Раствор ферментного субстрата загрязнен Откажитесь от субстрата, если существует синяя окраска. Убедитесь, что используются чистые резервуары с реагентами.

Низкие значения оптической плотности для стандартов

Возможная причина Решение
Стандартная ошибка разбавления Убедитесь, что разведения стандарта набора подготовлены правильно согласно инструкции ELISA QF-CMV.
Ошибка пипетирования Убедитесь, что трубы откалиброваны и использованы в соответствии с инструкциями производителя.
Слишком низкая температура инкубации Инкубацию ИФА следует проводить при комнатной температуре (22 ° С ± 5 ° С).
Используется неправильный фильтр считывателя пластин Пластина должна считываться при 450 нм с эталонным фильтром от 620 до 650 нм.
Реагенты слишком холодные Все реагенты, за исключением 100-кратного концентрата конъюгата, должны быть доведены до комнатной температуры перед началом анализа. Это займет примерно 1 час.
Срок годности комплекта / компонентов истек Убедитесь, что комплект используется до истечения срока годности.Убедитесь, что восстановленный стандарт и конъюгат 100x концентрат используются в течение 3 месяцев с даты вскрытия.

Нелинейная стандартная кривая и двойная изменчивость

Возможная причина Решение
Неполная промывка планшета Вымойте планшет по крайней мере 6 раз с 400 мкл / лунку промывочного буфера. В зависимости от используемой стиральной машины может потребоваться более 6 циклов мойки. Следует использовать время выдержки не менее 5 секунд между циклами.
Стандартная ошибка разбавления Убедитесь, что разведения стандарта набора подготовлены правильно в соответствии с инструкцией QF-CMV ELISA.
Плохое смешивание Тщательно перемешайте реагенты путем переворачивания или легкого встряхивания перед их добавлением в планшет.
Непоследовательная методика пипетирования или прерывание во время настройки анализа Образец и стандартное сложение должны выполняться непрерывно. Все реагенты должны быть подготовлены до начала анализа.